? ? ? ?上期推送，我們給大家介紹了CD161和LLT1，并且講述了CD161在NK細胞上的調控模式以及腫瘤微環(huán)境的巨大挑戰(zhàn)。本期，我們會接著帶來CD161成藥性的挑戰(zhàn)以及CD161在T細胞尤其是CD8+的T細胞的病理機制。 一、成藥性的挑戰(zhàn) ? ? ? ?考慮到以上困難，如果有CD161的研發(fā)管線，就非常值得借鑒，然而（圖9）：  ? 圖9 沒有公開信息表明，以CD161和LLT1為靶點的抗體，含有國際非專用名，并進入臨床研究了。 
圖10 沒有查到CD161抗體相關專利。但是其作為腫瘤治療靶點，已有若干申請，本圖舉例說明。 ? ? ? ?目前，CD161更多的是作為免疫細胞亞群的標記信號，以表征細胞亞群在不同疾病治療中的變化。 ? ? ? ?CD161/LLT1可能存在成藥的困難。分析原因，可能有： ? ? ? ?1. 阻斷結果的矛盾：阻斷對于NK細胞，可以釋放其免疫活性。然而對于T細胞，結果則相反，通過LLT1的阻斷實驗發(fā)現(xiàn)，在CD4+ CD8+的T細胞中，激活后的T細胞高表達CD161。不過，CD161也可能作為負反饋信號，卻缺少LLT1的結合，從而不能實現(xiàn)抑制。這需要調研相關病理情況。 ? ? ? ?2. CD161和LLT1的結合能力較弱：KD約48μM，二元復合體的穩(wěn)定性不強，阻斷活性不易判斷。參考NKG2A/CD94與HLA組成三元復合體，該三元復合體的結構可能更穩(wěn)定，以進行拮抗活性抗體的篩選，是值得參考的。 ? ? ? ?3. 結合表位：LLT1在體內受CLEC2D其他變體的干擾，表位難以選定。但是根據(jù)文獻報道，目前已存在的LLT1抗體，可以實現(xiàn)阻斷LLT1與CD161結合。 ? ? ? ?而CD161的結合表位，與N糖修飾關聯(lián)可能性較大。如果存在靶向的抗體，N糖修飾的個體差異，可能導致抗體脫靶。另外，RSCB-PDB數(shù)據(jù)庫中已有兩者的結構數(shù)據(jù)，有助于我們預測復合體結合情況，比如https://www.rcsb.org/structure/5MGT（圖11A），https://www.rcsb.org/structure/5MGR（圖11B）?？梢钥吹絅糖修飾在蛋白表位的位置。 A. LLT1胞外域 B. CD161胞外域 圖11 LLT1和CD161胞外域的晶體結構。使用該數(shù)據(jù)，我們可以模擬兩個分子的結合。
二、T細胞：向左，自身免疫；向右，腫瘤 ? ? ? ?CD161在T細胞，尤其是CD8+的T細胞的病理機制，也具有巨大的潛力。 ? ? ? ?有研究發(fā)現(xiàn)，北歐的多發(fā)性硬化癥（MS），與CD161在CD8+CD3+ T細胞中的異常過表達有關，血液中的CD161顯著高于健康人群（圖10）。CD161highCD8+CD3+ T細胞，伴隨高表達的IL-17，IL-12介導增殖，釋放IFN-γ。這些IFN-γ可能導致了MS患者大腦中的免疫損傷，以及異常的B細胞囊泡。 ? ? ? ?之前提到，CD161的表達與IL-17的分泌有很強的相關性。IL-17作為信息溝通的橋梁，在T細胞調節(jié)的獲得性免疫，以及針對細胞外的細菌、真菌的急性炎癥響應，起到重要的作用。IL-17是CD3γδ+的T細胞，或者Th17，或者NKT，產生的效應細胞因子，可激活中性粒細胞，并將其招募到感染和炎癥的部位。IL-17也是調節(jié)B細胞效應的細胞因子，在抗病毒方面有積極作用。 ? ? ? ?通常，我們認為MS與類風濕性關節(jié)炎（RA）類似，是一種自身免疫疾病。然而，CD161在其中的表現(xiàn)不同。MS患者中，CD161在CD8+的細胞毒性體細胞中，顯著高表達，而RA患者中，CD161在CD8+的細胞毒性體細胞中，顯著低表達（圖11）。 ? ? ? ?類似的，在克郎氏癥中，也是CD4+的T細胞中，異常高表達CD39和CD161。 圖12 CD161在MS患者中的異常高表達，可被IFN-β治療到低于正常水平。 
圖13 MS和RA中，CD8+或CD4+的T細胞上，CD161的陽性率近似（A、C）。然而，在CD8+的T細胞，通常認為是細胞毒性T細胞上，MS中CD161的表達顯著更高（B），CD4+的T細胞差異不大（D）。 ? ? ? ?對肝癌組織及患者的血液樣本的研究，發(fā)現(xiàn)對CD8+PD1+的T細胞（具有細胞毒性），CD161+和CD161-的呈現(xiàn)了分布上的顯著差異，而這種差異可能與不同的演化線路有關。CD161+的T細胞，在腫瘤組織的比例低于正常組織，但是CD161-的T細胞降低的比例更高。CD161+的T細胞，具有更強的細胞毒性、增殖能力、腫瘤組織浸潤性（圖14）。 ? ? ? ?這也預示著，激活CD161信號通路，而不是阻斷，可能更有利于抗腫瘤的治療。LLT1對CD161親和力不足，需要親和力更高的多肽、抗體。而激活型多肽、抗體的獲得，往往難于阻斷性抗體。 
圖14 CD161+的T細胞，不同于CD161-的T細胞，不依賴于LAG3-MHCII，具有更強的細胞毒性，增殖能力，以及浸潤腫瘤組織的能力。 
圖15 CD8+CD161+在感染（A）、腫瘤治療（B）、自身免疫（C）相關的機制。
三、結尾 ? ? ? ?CD161作為NK細胞的靶點，阻斷其與LLT1的結合，可以提高NK的細胞毒性。同時，CD161對細胞毒性T細胞的活性、記憶分化有正面作用，阻斷CD161反而減弱了免疫活性，不過，這種阻斷，在治療自身免疫疾病時，可以起到非常好的效果。因此，選擇CD161/LLT1阻斷型抗體的適應癥，需要考慮其免疫系統(tǒng)的細胞亞群的活性，是否適用于阻斷機制。 ? ? ? ?然而，根據(jù)clinictrial的搜索結果，CD161更多的是作為臨床實驗中，細胞亞群表征的標志物，與CD25、CD69、CD56的應用比較接近。
參考文獻： 1. Inhibitory CD161 receptor identified in glioma-infiltrating T cells by single-cell analysis. Mathewson, Ashenberg, Tirosh, et al., Cell (2021) 2. Natrual Killer Cells in Cancer Biology and Therapy. Songyang Wu, Tong Fu, Yizhou Jiang, Zhiming Shao. Molecular Cancer (2020) 3. Unleashing Natural Killer Cells in the Tumor Microenvironment - The Next Generation of Immunotherapy. Aviad Ben-Shmuel, Guy Biber and Mira Barda-Saad. Frontier in immunology (2020) 4. Roles of NK Cell Receptors 2B4 (CD244), CS1 (CD319), and LLT1 (CLEC2D) in Cancer. Casey W. Buller, Porunelloor A. Mathew and Stephen O. Mathew. Cancers (2020) 5. CAR-NK cells: A promising cellular immunotherapy for cancer. Guozhu Xie , Han Dong, Yong Liang , James Dongjoo Ham , Romee Rizwan, Jianzhu Chen. EBioMedicine (2020) 6. Targeting Natural Killer Cells for Tumor Immunotherapy. Cai Zhang, Yuan Hu, Chongdeng Shi. Frontier in immunology (2020) 7. Induction of Lectin-like Transcript 1 (LLT1) Protein Cell Surface Expression by Pathogens and Interferon-γ Contributes to Modulate Immune Response. Germain, Meier, Jensen, et al., The Journal od Biological Chemistry (2011) 8. Molecular Basis for LLT1 Protein Recognition by Human CD161 Protein (NKPR1A/KLRB1). Kamishikiryo, Fukuhara, Okabe, Kuroki, Maenaka. The Journal od Biological Chemistry (2011) 9. Alterations in KLRB1 genge expression and a Scandinavian multiple sclerosis association study of the KLRB1 SNP rs4763655. Helle, Finn, Jan, et al., European Journal of Human Genetics (2011) 10. CD161highCD8+T Cells Bear Pathogenetic Potential inMultiple Sclerosis. Annibali, Ristori, Angelini, et al., Brain (2011) 11. CD161（Human NKR-P1A） Signaling in NK Cells Involves the Activation of Acid Sphingomyelinase. Pozo, Gomez, Mavaddat, et al., The Journal of Immunology (2006) 12. CD161 is a marker of all human IL-17-producing T-cell subsets and is induced by RORC. Maggi, Santarlasci, Capone, et al., European Journal of Immunology (2010) 13. Beyond ecto-nucleotidase: CD39 defines human Th17 cells with CD161. Aiping Bai, Simon Robson. Purinergic Signalling (2015) 14. Lectin-Like Transcript 1 is a ligand for the CD161 receptor. Aldemir, Prod’bomme, et al., The Journal of Immunology (2005) 15. Characterization of Alternatively Spliced Transcript Variants of CLECD2D Gene. Germain, Bihl, Zahn, et al., The Journal of Biological Chemistry (2010) 16. CD161+ T(NT) cells exist predominantly in humab intestinal epithelium as well as in liver. IIAI, Watanabe, Suda, et al., Clinical Experimental Immunology (2002) 17. IL-12-induced up-regulation of NKRP1A expression in human NK cells and consequent NKRP1A-mediated down-regulation of NK cell activation. Poggi, Costa, Tomasello, Moretta, European Journal of Immunology (1998) 18. The identification and functional analysis of CD8+PD1+CD161+ T cells in hepatocellular carcinoma. Li, Zheng, Qiu, et al., Precision Oncology (2020) 19. CD8+CD161+ T-cells：Cytotoxic Meemory Cells With High Therapeutic Potential. Konduri, Oyewole-Said, Vazquez-Perez, et al., Frontier in immunology (2021) 20. CD161，KLRB1, https://www.uniprot.org/uniprot/Q12918 21. CLEC2D, LLT1, https://www.uniprot.org/uniprot/Q9UHP7 22. https://www.rcsb.org/structure/5MGT 23. https://www.rcsb.org/structure/5MGR |
